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PCR儀反應液污染處理方法

更新時間:2016-05-25      點擊次數(shù):2835
  PCR儀是一種利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內InVitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復制。因而,在PCR儀使用時對于環(huán)境要求很高,為了避免實驗未完成前可能出現(xiàn)的任何污染反應液的情況,應該了解關于反應液受到污染時,反應液處理方法:
  l  紫外照射法:未加模板和Taq聚合酶的PCR混合液進行紫外照射,注意事項與方法同上述UV照射法;
  l  內切酶法:選擇識別4個堿基的內切酶(如Msp I和Taq I等),可同時選擇幾種,以克服用一種酶只能識別特定序列的缺陷,室溫作用1h 后加熱滅活進行PCR;
  l  DNase I法:PCR混合液(未加模板和Taq聚合酶)加入0.5U DNase I,室溫反應30 min后加熱滅活,然后加入模板和Taq聚合酶進行正常PCR擴增。該方法的優(yōu)點是不需要知道污染DNA的序列;
  l  g射線輻射法:1.5kGy的輻射可*破壞0.1ng基因組DNA,2.0 kGy可破壞104拷貝的質粒分子,4.0 kGy仍不影響PCR,但高于此限度會使PCR擴增效率下降。引物可受照射而不影響PCR,g射線是通過水的離子化產生自由基來破壞DNA的。
  PCR儀的使用要求很高,因此不允許在實驗過程中出現(xiàn)一絲錯誤,尤其是任何與實驗有關的物品的污染情況。上述關于PCR儀反應液污染情況的及時處理方法一定能幫助您在實驗中出現(xiàn)類似情況時及時處理。

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